设计引物的网站 设计引物的网站有哪些

PCR时，引物的5‘端，有时需要加酶切位点，请问是怎么加上去的

DNA合成，新链的延伸方向是5→3 因此，需要在5端加上酶切位点 酶切位点可以上网查 同时，记得再加上一些保护碱基 因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来 保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查 那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列

如何利用pubmed blast引物，验证引物的准确性

　　先打开ncbi,再打开blast，然后在Nucleotide一栏找到Nucleotide-Nucleotide blast,然后在出来的网页中把你的上游或者下游引物序列输入后，选择人还是鼠的或是其他，点BLAST即可，再出来的网页点FOMAT，即可得到结果，主要看你的基因序列是否有且靠前，第一最好。